中华急诊医学杂志  2023, Vol. 32 Issue (7): 934-941   DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2023.07.014
 Abstract              PDF               Figures               Tables
引用本文 0
戴清霞, 何岱昆, 申捷, 邵义如. miR-28-5p在吸入性肺炎中的表达与临床意义[J]. 中华急诊医学杂志, 2023, 32(7): 934-941.
Dai Qingxia, He Daikun, Shen Jie, Shao Yiru. Expression and clinical significance of miR-28-5p in aspiration pneumonia[J]. Chin J Emerg Med, 2023, 32(7): 934-941.
miR-28-5p在吸入性肺炎中的表达与临床意义
戴清霞 , 何岱昆 , 申捷 , 邵义如     
复旦大学附属金山医院急危重病中心，复旦大学化学伤害急危重病医学研究中心，上海市卫生健康委化学伤害急危重病医学重点实验室，上海 201508
收稿日期: 2023-01-26
基金项目: 国家自然科学基金青年项目（82002027）；上海市卫生健康委员会面上项目（202040174）；上海市金山区科委医药卫生类科技创新资金项目（2019-3-07）
通信作者: 邵义如，Email: shaoyiru1983@163.com.
摘要: 目的 探讨miR-28-5p在吸入性肺炎患者中的表达水平及临床价值。方法 本研究为回顾性对照研究，选取复旦大学附属金山医院重症监护病房重症肺炎患者60例为研究组，根据发病因素分为吸入性肺炎组和其他感染性肺炎组，同时选取20例健康体检患者为健康对照组。采集研究组患者第1、4、7天的静脉血, 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测血清中miR-28-5p的表达水平；酶联免疫法（ELISA）测定各组血清中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达水平。收集研究组C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）的临床检测结果。采用SPSS 26.0进行统计分析，绘制受试者工作特征曲线（receiver operator characteristic，ROC）分析血清中miR-28-5p对吸入性肺炎的诊断价值。Pearson法分析血清miR-28-5p与IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、CRP和PCT水平的相关性。记录所有患者治疗10 d后的治疗效果，按预后良好与预后不良分为两组，分析miR-28-5p及各项炎症因子表达水平及预后的关系。结果 与健康对照组相比，研究组血清miR-28-5p表达水平显著升高，研究组中吸入性肺炎组血清miR-28-5p表达水平显著低于其他感染性肺炎组（P < 0.05）；与误吸发生时相比，研究组中吸入性肺炎组血清miR-28-5p表达水平显著升高（P < 0.05）。ROC曲线分析血清miR-28-5p表达对吸入性肺炎的诊断价值结果显示AUC为0.871，当临界值取1.211时，敏感度为76.67%，特异度为95.00%。Pearson相关分析结果显示miR-28-5p与IL-6呈正相关，与IL-4和IL-10呈负相关（P < 0.05）。ROC曲线分析显示年龄、miR-28-5p、IL-8、IL-10、TNF-α、CRP、PCT水平的曲线下面积分别为0.695、0.813、0.655、0.668、0.724、0.651、0.661。结论 血清miR-28-5p对吸入性肺炎的诊断具有重要参考意义，同时对区分吸入性肺炎的不同类型有一定的价值。血清miR-28-5p有可能作为潜在评估重症肺炎患者预后的标志物。年龄、TNF-α、IL-8、IL-10、CRP、PCT等也与重症肺炎的预后相关。
关键词: 吸入性肺炎    miR-28-5p    早期诊断    诊断效能    预后    
Expression and clinical significance of miR-28-5p in aspiration pneumonia
Dai Qingxia , He Daikun , Shen Jie , Shao Yiru     
Center of Emergency and Critical Medicine, Jinshan Hospital of Fudan University; Research Center for Chemical Injury, Emergency and Critical Medicine of Fudan University; Key Laboratory of Chemical Injury, Emergency and Critical Medicine of Shanghai Municipal Health Commission, Shanghai 201508, China
Fund program: Youth Project of National Natural Science Foundation of China(82002027); Shanghai Municipal Health Commission Project (202040174); Medical and Health Science and Technology Innovation Fund Project of Shanghai Jinshan District Science and Technology Commission(2019-3-07)
Corresponding author: Shao Yiru, Email: shaoyiru1983@163.com.
Abstract: Objective To investigate the expression level and clinical value of miR-28-5p in patients with aspiration pneumonia. Methods This was a retrospective controlled study. A total of 60 patients with severe pneumonia in the Intensive Care Unit of Jinshan Hospital Affiliated to Fudan University were selected as the study group. According to the pathogenic factors, the patients were divided into the aspiration pneumonia group and other infectious pneumonia group. At the same time, 20 healthy physical examination patients in our hospital were selected as the healthy control group. Venous blood was collected from patients in the study group on days 1, 4, and 7. The expression level of miR-28-5p in serum was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), and the serum levels of interleukin-4 (IL-4), IL-6, IL-8, IL-10, and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) assay. The clinical detection Results of C-reactive protein (CRP) and procalcitonin (PCT) in the study group were collected. Statistical analysis was conducted with SPSS 26.0. Then the diagnostic value of serum miR-28-5p for aspiration pneumonia was analyzed by receiver operating characteristic (ROC) curve, and the correlation between serum miR-28-5p and IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, CRP and PCT was analyzed by Pearson method. According to the clinical effect of 10 days of treatment, the patients were divided into the good prognosis and poor prognosis groups, and the relationship between miR-28-5p and the expression levels of various inflammatory factors and prognosis was analyzed. Results Compared with the healthy control group, the level of serum miR-28-5p in the study group was significantly increased, and the level of serum miR-28-5p in the aspiration pneumonia group was much lower than that in the other infectious pneumonia group (P < 0.05). Compared with day 0, the expression level of serum miR-28-5p in the aspiration pneumonia group was highly increased, with statistical significance (P < 0.05). ROC curve of serum miR-28-5p expression in aspiration pneumonia showed that AUC was 0.871. When the critical value was 1.211, the sensitivity was 76.67% and the specificity was 95%. Pearson correlation analysis showed that miR-28-5p was positively correlated with IL-6 (P < 0.05), and negatively correlated with IL-4 and IL-10 (P < 0.05). ROC curve analysis showed that the area under the curve of age, miR-28-5p, IL-8, IL-10, TNF-α, CRP, and PCT were 0.695, 0.813, 0.655, 0.668, 0.724, 0.651, and 0.661, respectively. Conclusions Serum miR-28-5p has important reference significance for the diagnosis of aspiration pneumonia, and has certain value for distinguishing different types of aspiration pneumonia. The expression of miR-28-5p in serum is expected to be a new biomarker to judge the prognosis of patients with severe pneumonia. Age, TNF-α, IL-8, IL-10, CRP and PCT are correlated to the prognosis of severe pneumonia.
Key words: Aspiration pneumonia    miR-28-5p    Early diagnosis    Diagnostic efficiency    Prognosis    

吸入性肺炎(aspiration pneumonia，AP)指患者存在各种误吸危险因素如意识障碍、吞咽障碍、呛咳反射减弱等导致误吸发生后由特定微生物引起的感染疾病逐步进展至影像学上有肺部渗出表现的肺部实质性炎症。一般可分类如下，一是吸入的物质可以直接的损伤肺组织而导致的化学性炎症，另一类为吸入混有细菌定植物的口咽分泌物后而导致的细菌性肺炎[1]。吸入性化学性肺炎的肺损伤的发病机制与吸入细菌性肺炎不同，基于以前的研究，针对肺损伤的过程(直接或间接)而言归纳为原发性肺损伤和继发性肺损伤。不同的损伤机制决定了治疗方向的不同，特别是临床上激素的应用及抗感染治疗的时机。因此寻找特异性生物标志，可准确指导临床治疗进而改善预后。众多研究表明microRNA(miRNA)介导的信号通路在呼吸系统疾病的发生发展过程中对气道炎症等病理生理过程发挥着重要作用[2]，miRNA也与脓毒血症、炎症指标、肿瘤等有一定相关性[3-4]。随着miRNA临床研究的开展，目前与许多疾病特异性相关的miRNA被开发成诊断试剂盒，也有通过合成miRNA抑制剂特异性干扰相关蛋白的翻译过程达到治疗目的[5-6]。本团队前期吸入性肺损伤的动物模型结果提miR-28-5p是最有可能的活性miRNA。进一步研究发现转染miR-28-5p的MSCs可通过靶向抑制FOXN3，进而促进Wnt/β-catenin通路，在大鼠光气吸入性肺损伤修复中发挥修复保护作用[7]。本研究检测血清中miR-28-5p与炎症因子的表达水平，明确此miRNA在吸入性肺炎中的临床意义，建立吸入性肺炎诊治的生物学新标志物。

1 资料与方法 1.1 一般资料

按《2009年美国传染病学会（IDSA）/美国胸科学会（ATS）》指南确立的诊断标准确选择2019年12月至2020年12月于复旦大学附属金山医院重症监护病房住院年龄 > 18岁的重症肺炎患者60例为研究组，吸入性肺炎组30例，其他感染性肺炎组30例。同期选取本院健康体检患者为健康对照组，对照组要求平素身体基本健康，无系统基础疾病。

该研究全过程符合国家所规定的相关医学伦理学标准，并且通过复旦大学附属金山医院伦理委员会批准（审批号：JIEC-2019-S35），研究内容已提前告知患者或家属并签署相关知情同意书。

1.1.1 纳入标准

吸入性肺炎组同时符合以下⑴~⑷条件的重症肺炎需有创机械通气治疗的吸入性肺炎患者。

⑴吸入性肺炎定义：任何因素导致的吸入性肺炎，符合以下之一。①吸入化学毒物如化学制剂、气体、烟雾和蒸汽引起直接损伤肺组织导致的肺的化学性炎症；②因吸入食物、呕吐物引起的吸入性肺炎；③吸入胃酸所致吸入性肺炎；④含有定植细菌的口咽分泌物被吸入引起的细菌性肺炎；⑤临床观察老年体弱、吞咽困难、麻醉或昏迷患者，结合其有关基础疾病（如脑卒中等）判断存在吸入性肺炎的情况。

⑵肺炎诊断标准：参照2012年标准（WS 382-2012；中华人民共和国卫生部；2012-09-03）。

⑶重症肺炎的诊断标准：参照2007年美国感染疾病协会/美国胸科协会（IDSA/ATS）重症肺炎诊治指南标准。

⑷有创机械通气指征：满足机械通气指征，入组时即存在高碳酸血症PaCO2 > 50 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）或经初始氧疗PaCO2上升 > 10 mmHg；或存在无创机械通气的禁忌证。

其他感染性肺炎组：排除上述吸入性因素[条件⑴]和损伤等因素，同时符合上述⑵~⑷的重症肺炎需有创机械通气治疗的患者。

1.1.2 排除标准

① 自身免疫功能受损患者；②存在3个或以上器官功能障碍；③已经存在广泛转移、预计生存期短及接受化疗治疗的恶性肿瘤患者；④患者存在肺部肿瘤及间质性肺炎。

参考1993年卫生部药政局颁布的《抗生素临床研究指导原则》中的标准进行本研究的疗效判断，根据10 d后的治疗效果，将研究组分为预后良好组（进步、显效或痊愈）和预后不良组（无效或死亡）。临床疗效评价标准包括体征、临床症状、病原学检查以及实验室检查相关指标等：①痊愈：各项检查结果均提示恢复正常；②显效：四项检查中至少有一项未完全恢复至正常，病情表现为明显好转；③进步：四项检查均未达到显效标准，病情判定为进步；④无效：病情加重甚至死亡，症状改善不明显。

1.2 方法 1.2.1 标本收集及处理

使用黄色真空管采集研究组患者第1、4、7天的静脉血3 mL，本院健康体检患者静脉血3 mL，对收集的样本进行预处理，使用离心机3 000 r/min离心10 min后留取上层血清放置于−80℃条件下保存。

1.2.2 血清中miR-28-5p的检测

采用Trizol（美国Invitrogen公司）法提取血清中的总RNA，应用紫外分光光度计测定RNA浓度。根据反转录试剂盒（购自日本TAKARA公司）操作说明将总RNA反转录合成cDNA。引物（上海生工生物工程股份有限公司）以cDNA为模板进行RT-PCR反应，反应体系：TB Green Premix Ex Taq 10 μL，正反向引物0.4 μL，反向引物0.4 μL，cDNA 2 μL，ddH2O补足体系至20 μL；反应条件：95℃预变性30 s，95℃变性5 s，60℃退火31 s，共循环40次，采用2-ΔΔCt法计算相对表达量。引物序列见表 1。

表 1 引物序列 Table 1 Primer sequence
引物名称 引物序列（5’-3’) 长度(bp)
hsa-miR-28-5p-RT GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAG
GTATTCGCACTGGATACGACCTCA
AT		  
hsa-miR-28-5p-S TCGCAAGGAGCTCACAGTCT 20
hsa-miR-28-5p AAGGAGCUCACAGUCUAUUGAG  
表选项
1.2.3 血清中炎症因子的检测

采用武汉云克隆科技有限股份公司的ELISA试剂盒来测定研究组血清中TNF-α、IL-8、IL-6、IL-4、IL-10的表达水平。

1.2.4 治疗方法

研究组患者均遵循《2007年IDSA/ATS的重症肺炎诊治指南》中常规治疗原则，包括改善循环功能、促进气道分泌物排出（吸痰、翻身拍背、纤维支气管镜肺泡灌洗等）、敏感抗生素治疗、改善通气（吸氧、支气管扩张剂、机械通气等）、维持水电平衡、营养支持等。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0进行统计分析。符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，两组资料均数比较采用独立样本t检验，三组或三组以上资料均数采用单因素方差分析（One-way Anova检验）；计数资料采用χ2检验；使用Pearson法分析研究组血清miR-28-5p表达与TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、CRP、PCT水平的相关性；绘制ROC曲线分析BALF中miR-28-5p表达量对吸入性肺炎的诊断价值，以及各炎症因子对重症肺炎的预后评估价值。以P < 0.05表示差异有统计学意义。

2 结果 2.1 一般资料对比

共纳入患者60例，男性35例，女性25例。吸入性肺炎组基础疾病分布：脑卒中后10例，心肺复苏后5例，痴呆3例，癫痫3例，肠梗阻2例，气体吸入3例，消化道出血及咯血2例，外科术后2例。其他吸入性肺炎组基础疾病分布：社区获得性患者22例，院内获得性8例。病程第1天收集标本60例，第4天收集标本57例，第7天收集标本50例，其余患者因病情变化未完成标本收集。第10天对所有患者进行临床疗效以及预后评估，根据结果分为预后良好和预后不良组。

2.2 吸入性肺炎组与其他感染性肺炎组基线资料对比

吸入性肺炎组与其他感染性肺炎组对比年龄、性别及预后等基线资料，两组间差异无统计学意义（P > 0.05），见表 2。同时对两组10 d内存活天数采用Log-Rank检验进行生存曲线比较，差异无统计学意义（P > 0.05），见图 1。

表 2 吸入性肺炎组与其他感染性肺炎组基线资料对比 Table 2 Comparison of general data between the aspiration pneumonia and other infectious pneumonia groups
项目 吸入性肺炎(n=30) 其他感染性肺炎(n=30) 统计值 P值
年龄(岁)a 67.73±11.69 66.60±9.20 0.417 0.678
性别b     0.617 0.601
   男性 19 (63.3) 16 (53.3)    
   女性 11 (36.7) 14 (46.7)    
预后良好 15 (50) 14 (46.7) 0.067 1.000
注：a为（x±s），b为例(%)
表选项

图 1 吸入性肺炎组与其他感染性肺炎组生存曲线分析 Fig 1 Survival curve analysis of the aspiration pneumonia group and other infectious pneumonia group
图选项
2.3 预后良好组与预后不良组基线资料对比

对预后良好组与预后不良组进行年龄、性别基线资料对比，显示两组性别与预后无明显关系（P > 0.05）；预后良好组患者年龄低于预后不良组，差异有统计学意义（P < 0.05），见表 3。

表 3 预后良好组与预后不良组基线资料对比 Table 3 Comparison of general data between the good prognosis group and poor prognosis group
项目 预后良好(n=29) 预后不良(n=31) 统计值 P值
年龄(岁)a 63.31±11.70 70.77±7.69 0.092 0.005
性别b     0.231 0.794
   男性 16 (55.2) 19 (61.3)    
   女性 13 (44.8) 12 (38.7)    
注：a为（x±s），b为例(%)
表选项
2.4 血清中miR-28-5p及TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10的表达 2.4.1 miR-28-5p表达水平

与健康对照组相比，研究组患者血清中miR-28-5p表达水平显著升高，且在研究组中吸入性肺炎组血清中miR-28-5p表达水平显著低于其他感染性肺炎组（P < 0.05），见表 4；误吸后即d0血清中miR-28-5p表达水平与健康对照组相比有升高趋势，但差异无明显统计学意义（P > 0.05），表达水平显著低于研究组中d1，差异有统计学意义（P < 0.05），见表 5。

表 4 研究组及健康对照组miR-28-5p随治疗时间表达水平的比较（x±s） Table 4 Comparison of miR-28-5p expression levels between the study group and the control group（x±s）
组别 n1 n4 n7 第1天 第4天 第7天
吸入性肺炎组 30 28 25 1.26±0.27 ab 1.31±0.30 ab 1.20±0.25 ab
其他感染性肺炎组 30 29 25 1.47±0.22a 1.54±0.18a 1.43±0.26a
健康对照组 20 — — 1.06±0.11 1.06±0.11 1.06±0.11
F值       28.350 16.385 16.338
P值       < 0.001 < 0.001 < 0.001
注：与健康对照组相比，aP < 0.05；与其他感染性肺炎组比，bP < 0.05
表选项

表 5 误吸后与研究组d1及健康对照组miR-28-5p表达水平的比较（x±s） Table 5 Comparison of miR-28-5p expression levels between the study group and healthy control group （x±s）
组别 例数 miR-28-5p
d0 吸入性肺炎组 30 1.12±0.17
d1 吸入性肺炎组 30 1.26±0.27a
d1 其他感染性肺炎组 30 1.47±0.22a
健康对照组 20 1.06±0.11
F值   13.075
P值   < 0.001
注：与吸入性肺炎d0相比，aP < 0.05
表选项
2.4.2 血清中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10水平

健康对照组相比，研究组血清中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10水平显著升高，差异具有统计学意义（P < 0.05）；研究组中，血清中TNF-α、IL-8水平在吸入性肺炎与其他感染性肺炎组中差异无统计学意义（P > 0.05），吸入性肺炎组血清中IL-4、IL-10水平显著高于其他感染性肺炎组，血清中IL-6水平显著低于其他感染性肺炎组（P < 0.05），见表 6。

表 6 研究组与对照组血清中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10随治疗时间水平的变化（x±s） Table 6 The changes of TNF-α, IL-4, IL-6, IL-8, and IL-10 in the study group and control group（x±s）
组别 n TNF-α IL-4 IL-6 IL-8 IL-10
对照组 20 20.70±3.07 23.33±2.20 23.40±3.52 21.16±1.79 10.29±2.77
第1天            
   吸入性肺炎组 30 102.4±22.58 ab 73.46±10.83ac 89.4±15.44ab 91.66±21.84ac 78.82±13.14ab
   其他感染性肺炎组 30 108.7±26.24a 67.92±11.58a 94.56±10.09a 100.43±19.28a 64.66±16.87a
第4天            
   吸入性肺炎组 28 110.86±19.59 ab 68.5±9.78ac 92.74±13.48ab 95.62±17.72ac 73.63±14.9ab
   其他感染性肺炎组 29 110.75±21.07a 58.51±9.70a 102.12±18.74a 97.64±15.38a 62.96±14.66a
第7天            
   吸入性肺炎组 25 105.09±16.66 ab 70.3±9.89ac 85.07±11.59ab 86.21±18.92ac 89.36±19.00ab
   其他感染性肺炎组 25 102.41±17.20a 61.31±11.83a 94.50±16.87a 90.31±15.83a 75.63±15.32a
注：与对照组相比，aP < 0.05；与其他感染性肺炎组相比，bP > 0.05，cP < 0.05
表选项
2.5 研究组中CRP及PCT水平的比较

临床收集CRP、PCT指标在吸入性肺炎组与其他感染性肺炎组中水平差异无统计学意义（P > 0.05）, 在两组中CRP及PCT水平随着治疗时间整体呈现逐渐下降的趋势，见表 7。

表 7 吸入性肺炎组与其他感染性肺炎组CRP、PCT水平比较 Table 7 Comparison of CRP and PCT levels between the aspiration pneumonia group and other infectious pneumonia group
指标 吸入性肺炎组 其他感染性肺炎组 t/Z值 P值
CRP        
   第1天 95.97±22.30 117.78±11.61 -1.476 0.145
   第4天 89.31±22.02 99.17±11.55 -2.415 0.056
   第7天 63.51±11.48 78.43±15.85 -0.273 0.789
PCT        
   第1天 12.73±9.96 16.30±10.03 -0.617 0.541
   第4天 22.78±6.58 14.75±8.49 0.643 0.243
   第7天 8.23±2.41 4.27±2.78 0.272 0.736
表选项
2.6 血清中miR-28-5p表达与TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、CRP、PCT水平的相关性

采用Pearson相关分析，结果显示miR-28-5p与IL-6呈正相关，与IL-4、IL-10呈负相关（P < 0.05），与TNF-α、IL-8、CRP、PCT无明显相关性，见表 8。

表 8 研究组miR-28-5p与各炎症因子及炎症指标的相关性 Table 8 The correlation between miR-28-5p and inflammatory factors in the study group
指标 第1天   第4天   第7天
r值 P值   r值 P值   r值 P值
TNF-α 0.255 0.087   0.291 0.06   0.067 0.375
IL4 -0.388 0.017   -0.438 0.01   -0.344 0.031
IL6 0.336 0.024   0.319 0.037   0.307 0.041
IL8 0.057 0.383   0.087 0.331   0.036 0.415
IL10 -0.399 0.014   -0.467 0.018   -0.383 0.016
CRP 0.072 0.584   -0.052 0.703   0.069 0.636
PCT -0.009 0.946   0.025 0.852   0.035 0.809
表选项
2.7 血清miR-28-5p对吸入性肺炎的诊断价值

采用ROC法分析血清miR-28-5p对吸入性肺炎的诊断价值，结果显示，AUC为0.871，预测准确性较高，95%可信区间为0.772~0.969，当miR-28-5p表达水平2–ΔΔCT最佳临界值为1.221时，敏感度、特异度分别为95.00%和76.67%，见表 9、图 2。

表 9 血清miR-28-5p对吸入性肺炎诊断的效能指标 Table 9 The efficacy index of miR-28-5p in the diagnosis of aspiration pneumonia
指标 特异度(%) 敏感度(%) AUC 约登指数 截断值 95%CI P值
miR-28-5p 95.00 76.67 0.871 0.762 1.211 0.772~0.969 < 0.001
表选项

图 2 血清miR-28-5p对吸入性肺炎诊断的ROC曲线 Fig 2 ROC curve of miR-28-5p in the diagnosis of aspiration pneumonia
图选项
2.8 预后良好组与预后不良组各指标比较

结果显示，预后良好组miR-28-5p表达水平随病程呈下降趋势，预后不良组呈上升趋势。两组同期比较，第1天miR-28-5p表达水平明显高于预后不良组，第4、7天低于预后不良组，两者差异有统计学意义（P < 0.05）。预后良好组TNF-α、IL-6水平随病程呈现先上升后下降趋势，IL-4呈上升趋势，预后不良组呈上升趋势或下降趋势不明显。两组同期比较，TNF-α水平在第1、4天明显高于预后不良组，第7天低于预后不良组，两者差异有统计学意义（P < 0.05）；IL-4水平在第1天在两组中水平无明显统计学差异（P > 0.05），第4天和第7天预后良好组中IL-4水平显著高于预后不良组，两者差异均有统计学意义（P < 0.05）；预后良好组IL-6水平在第1天、第4天和第7天于预后不良组，两者差异均具有有统计学意义（P < 0.05）。预后良好组IL-8、CRP、PCT随病程呈下降趋势，预后不良组呈上升趋势或下降趋势不明显，IL-10在两组中均呈上升趋势。两组同期比较，预后良好组IL-8水平在第1、4天明显高于预后不良组，第7天低于预后不良，IL-10、CRP和PCT的表达水平在第1、4和7天后显著高于预后不良组，两者差异均具有统计学意义（P < 0.05），见表 10。

表 10 两组患者治疗各时间点miR-28-5p表达及TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、CRP、PCT水平动态变化 Table 10 Dynamic changes in miR-28-5, TNF-α, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, CRP, and PCT levels at different time points in the good prognosis and poor prognosis groups
组别 miR-28-5p TNF-α IL-4 IL-6 IL-8 IL-10 CRP PCT
第1天                
  良好组 1.43±0.16 114.98±21.29 ab 74.96±10.46 ac 103.75±15.34 b 98.44±17.45 ac 89.60±13.73 b 92.78±44.73 10.44±6.02
  不良组 1.26±0.26 96.73±24.27 a 71.53±12.59 a 93.33±20.80 a 87.03±19.31 a 79.55±14.59 a 120.06±47.78 18.32±9.09
t/z值 3.291 3.088 1.143 2.196 2.397 2.745 -3.865 -2.384
P值 0.002 0.003 0.258 0.032 0.020 0.008 0.047 0.034
组别 miR-28-5p TNF-α IL-4 IL-6 IL-8 IL-10 CRP PCT
第4天                
  良好组 1.35±0.11 119.80±15.30 ab 75.34±11.75 ac 104.03±12.23 ab 1.35±0.11 ac 88.85±12.63 b 72.04±29.72 9.92±4.07
  不良组 1.49±0.33 102.49±20.60 a 68.33±9.58 a 90.40±18.76 a 101.80±14.97 a 81.10±14.35 a 96.44±25.96 15.45±7.21
t/z值 -2.185 3.800 2.515 3.238 -2.838 2.165 -3.941 -2.445
P值 0.038 < 0.001 0.015 0.002 0.007 0.035 0.037 0.039
组别 miR-28-5p TNF-α IL-4 IL-6 IL-8 IL-10 CRP PCT
第7天                
  良好组 1.21±0.15 103.23±14.61 ab 81.57±9.43 ac 92.20±14.35 ab 83.12±11.92 ac 97.95±12.20 ab 40.65±12.91 2.05±1.22
  不良组 1.45±0.34 111.60±11.98 a 71.66±12.22 a 91.22±18.62 a 95.34±21.24 a 87.34±16.63 a 99.46±41.92 17.61±8.05
t/z值 -3.101 -2.152 3.164 0.202 -2.382 2.305 -3.407 -2.142
P值 0.005 0.036 0.003 0.834 0.024 0.026 0.002 0.029
注：与预后不良组比较，aP < 0.05；与预后不良组比较，bP < 0.05；与预后不良组比较，cP < 0.05
表选项
2.9 年龄、miR-28-5p表达及TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、CRP、PCT水平与预后的相关性

根据结果8提示年龄、miR-28-5p表达及TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、CRP、PCT水平与重症肺炎患者预后存在相关性，进一步采用ROC曲线分析年龄、第1天miR-28-5p表达及TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、CRP、PCT水平与预后的关系，结果显示年龄、miR-28-5p表达与IL-8、IL-10、TNF-α、CRP、PCT水平的曲线下面积分别为0.695、0.813、0.655、0.668、0.724、0.651、0.661，各参数指标敏感度、特异度见表 11、图 3。

表 11 血清中各指标及年龄预测重症肺炎预后的效能指标 Table 11 Effectiveness indicators for predicting prognosis of severe pneumonia by various indicators and age
指标 特异度（%） 敏感度（%） AUC 约登指数 截断值 95%CI P值
miR-28-5p 79.31 67.74 0.813 0.3548 1.224 0.708~0.918 < 0.001
年龄 41.94 96.55 0.695 0.3849 74.5 0.562~0.827 0.010
IL-4 48.39 82.76 0.598 0.3115 67.4 0.452~0.745 0.190
IL-6 38.71 89.66 0.641 0.2837 84.05 0.501~0.781 0.060
IL-8 62.07 77.42 0.655 0.3949 96.1 0.514~0.796 0.039
IL-10 41.38 90.32 0.668 0.3170 95.82 0.530~0.807 0.025
TNF-α 61.29 86.21 0.724 0.4750 96.24 0.592~0.857 0.003
CRP 68.97 67.74 0.651 0.3671 98.13 0.511~0.792 0.044
PCT 41.38 87.10 0.661 0.2848 3.180 0.524~0.799 0.032
表选项

图 3 血清中各指标及年龄预测重症肺炎患者预后的ROC曲线 Fig 3 ROC curve of each index and age in predicting the prognosis of patients with severe pneumonia
图选项
3 讨论

误吸是大部分肺炎的主要发病因素，目前国内尚无对于吸入性肺炎发病率和病死率的多中心大样本数据研究。国内单中心样本研究表明在年龄≥60岁和年龄≥55岁老年住院患者中，吸入性肺炎的发病率分别为13.4%和14.0%[8]。一项国外单中心回顾性研究显示，吸入性肺炎患者在1年、3年、5年病死率分别高达49.0%、67.1%、76.9%[9]。目前因为缺乏吸入性肺炎典型的临床表现和特异性标志物，对其进行诊断和区分不同类型仍有困难。常用的一些指标缺乏特异性且受主观因素的影响大，在吸入性肺炎的诊断中价值有限[10]。

miRNA作为基因表达负性调节因子中的一种，通过调控靶信使RNA的稳定性及翻译效率进而参与免疫调节，淋巴细胞、单核细胞和嗜中粒细胞的发育、分化、增殖，以及抗体的产生。其中miRNA通过调节Toll样受体，参与细胞因子的应答来介导人体先天免疫，从而提升免疫力及增强机体抵抗能力[11]。已有研究证实miRNA在慢性呼吸系统疾病、肺部感染性疾病、肺部肿瘤、肺结核等疾病中是驱动和调节因素。miRNA也与脓毒血症、炎症指标等有一定相关性[2-4]。

结果显示与健康对照组及误吸发生后相比，吸入性肺炎组患者血清中miR-28-5p表达明显上调，研究证实miR-28-5p可能参与调节误吸发生后出现吸入性肺炎的病理生理过程。血清中miR-28-5p作为临床中预测吸入性肺炎发生的基因学诊断依据，但由于血清中miR-28-5p敏感度较低，仅为76.67%，使用miR-28-5p辅助诊断吸入性肺炎需警惕假阴性可能。也有研究表明miR-28-5p可调节间充质干细胞的功能促进光气所致吸入性肺损伤的修复[7]。吸入性肺炎组患者血清中miR-28-5p表达在病程中整体呈现为先上升后下降趋势，其他感染性肺炎组较吸入性肺炎组血清中miR-28-5p表达上调更加显著，提示误吸发生后的吸入性肺损伤病理生理过程可能分为肺实质的原发性损伤即化学源性肺损伤和继发性分炎症反应即吸入性肺炎，对于区分吸入性肺损伤的不同类型有一定的参考价值。对于任何疾病而言单一的生物标志物诊断价值有限, 多种生物学标志物联合应用并结合患者发病因素及临床症状可提高吸入性肺炎诊断的敏感度及特异度。

本研究也检测了血清中不同时间段TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10的表达水平，同时收集对应时间的CRP、PCT浓度，并对miR-28-5p与各项炎症因子的相关性进行了分析，结果显示miR-28-5p与IL-6的水平呈正相关，miR-28-5p与IL-4和IL-10的表达水平呈负相关；IL-10为常见的抑炎因子，IL-4和IL-6为促炎因子，结果提示miR-28-5p对机体炎症反应过程存在正负调节。免疫反应在重症肺炎中具有十分重要的作用，而miR-28-5p能够参与调控炎症因子，因此重症肺炎患者预后不良可能是机体受到miR-28-5p的调控；预后不良组患者体内的miR-28-5p水平表达上调，致使患者机体的IL-10等抑炎因子合成减少，促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8等相对合成增多，炎症反应失衡导致机体免疫紊乱使得患者预后变差[12]。有综述对IL-10在感染中的作用进行了阐述[13-15]，IL-10是一种普遍的抑制性细胞因子，可通过抑制先天免疫和适应性免疫的促炎反应，防止免疫反应加剧引起相关组织的损伤，发挥保护作用。因此，IL-10在炎症消退阶段是一种中枢细胞因子，对患者预后存在重要意义。预后不良组经治疗后炎性因子TNF-α、IL-8、CRP、PCT高于预后良好组，并且维持在相对较高的水平，可能是由于机体出现“炎症风暴”致使患者预后不良。且预后不良组患者年龄显著大于预后良好组，提示预后可能与miR-28-5p、TNF-α、IL-8、IL-10、CRP、PCT、年龄等相关。研究结果显示miR-28-5p对重症肺炎预后的预后具有一定的效能，但敏感度和特异度均偏低，需结合患者年龄、意识情况、循环及脏器功能等变化趋势，提高对预后预测的准确性。

利益冲突  所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明  戴清霞：分子生物学实验、数据收集及整理、论文撰写；何岱昆：校对数据及统计学分析；申捷：课题设计；邵义如：研究设计、论文书写指导、论文修改

参考文献
[1] Mandell LA, Niederman MS. Aspiration Pneumonia. N Engl J Med[J]. 2019, 14;380(7): 651-663. DOI: 10.1056/NEJMra1714562.
[2] Rebane A, Akdis CA. MicroRNAs in allergy and asthma[J]. Curr Allergy Asthma Rep, 2014, 14(4): 424. DOI:10.1007/s11882-014-0424-x
[3] How CK, Hou SK, Shih HC, et al. Expression profile of microRNAs in gram-negative bacterial sepsis[J]. Shock, 2015, 43(2): 121-127. DOI:10.1097/SHK.0000000000000282
[4] Ali Syeda Z, Langden SSS, Munkhzul C, et al. Regulatory Mechanism of MicroRNA Expression in Cancer[J]. Int J Mol Sci, 2020, 21(5): 1723. DOI:10.3390/ijms21051723
[5] Case SR, Martin RJ, Jiang D, et al. MicroRNA-21 inhibits toll-like receptor 2 agonist-induced lung inflammation in mice[J]. Exp Lung Res, 2011, 37(8): 500-508. DOI:10.3109/01902148.2011.596895
[6] Carthew RW, Sontheimer EJ. Origins and mechanisms of miRNAs and siRNAs[J]. Cell, 2009, 136(4): 642-655. DOI:10.1016/j.cell.2009.01.035
[7] Xu N, He DK, Shao YR, et al. Lung-derived exosomes in phosgene-induced acute lung injury regulate the functions of mesenchymal stem cells partially via miR-28-5p[J]. Biomedecine Pharmacother, 2020, 121: 109603. DOI:10.1016/j.biopha.2019.109603
[8] 舒方茂, 宋宁, 张宇. 吸入性肺炎研究进展[J]. 国际呼吸杂志, 2020, 40(3): 215-219. DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2020.03.011
[9] Yoon HY, Shim SS, Kim SJ, et al. Long-Term Mortality and Prognostic Factors in Aspiration Pneumonia[J]. J Am Med Dir Assoc, 2019, 20(9): 1098-1104. DOI:10.1016/j.jamda.2019.03.029
[10] 张晨露, 牛小媛. 吸入性肺炎相关生物学标记物的研究进展[J]. 中华临床医师杂志电子版, 2017, 11(4): 650-653. DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2017.04.024
[11] 徐广峰, 伍华东, 丁颖. microRNA与mRNA不同位点结合后的生物学效应研究进展[J]. 山东医药, 2017, 57(30): 111-112. DOI:10.3969/j.issn.1002-266X.2017.30.036
[12] 何岱昆, 沈雪婷, 王丽娜, 等. 基线CRP、NLR和LER对急性脑梗死患者发生吸入性肺炎的预测价值[J]. 中华急诊医学杂志, 2022, 31(12): 1635-1641. DOI:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2022.12.012
[13] Islam H, Neudorf H, Mui AL, Little JP. Interpreting 'anti-inflammatory' cytokine responses to exercise: focus on interleukin-10[J]. J Physiol, 2021, 599(23): 5163-5177. DOI:10.1113/JP281356
[14] Saxton RA, Tsutsumi N, Su LL, et al. Structure-based decoupling of the pro-and anti-inflammatory functions of interleukin-10[J]. Science, 2021, 371(6535). DOI:10.1126/science.abc8433
[15] Saraiva M, Vieira P, O'Garra A. Biology and therapeutic potential of interleukin-10[J]. J Exp Med, 2020, 217(1): e20190418. DOI:10.1084/jem.20190418