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目的 利用原代培养的大鼠肝细胞,观察不同浓度的谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在体外对白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)刺激下肝细胞一氧化氮(Nitric oxide,NO)过度产生和线粒体膜电位降低的影响。
方法 选用6周龄SD大鼠,采用原位胶原酶循环灌注消化法获取高纯度原代大鼠肝细胞,培养48 h后分别用生理盐水、IL-1β(1 nmol/L)以及IL-1β(1 nmol/L)联合不同浓度的Gln(2 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)刺激肝细胞24 h,留取细胞和上清液,采用生化法测定上清液丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和NO的水平,采用荧光探针JC-1结合流式细胞仪检测肝细胞线粒体膜电位的变化。对各组数据之间进行方差分析,明确是否具有统计学意义。
结果 IL-1β刺激后肝细胞培养液ALT平均浓度为38.2 U/L、NO的平均浓度为72.7 μmol/L,均显著高于生理盐水组(分别为7.4 U/L和41.7 μmol/L,P<0.01),而肝细胞线粒体膜电位水平却明显低于生理盐水组(强红色荧光细胞比例分别为30.0%和62.8%,P<0.01);同时给与Gln能够抑制IL-1β刺激下肝细胞NO的产生,减轻ALT的升高以及线粒体膜电位的降低,并且这些作用随着Gln浓度的增加而增强。
结论 谷氨酰胺对炎症应激导致的肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用可能与抑制肝细胞NO的过度产生改善线粒体呼吸功能有关。