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基于Notch通路探讨缺氧对小胶质细胞IL-1β表达的影响
The effect of Notch pathway on IL-1β expression in hypoxic BV-2 microglia
作者:韩永丽,黎春常,丁洪光,黄林强,刘新强,陈胜龙,曾红科
发布日期:2020-12-02

目的 探讨缺氧后小胶质细胞Notch信号通路是否激活,及其对IL-1β表达的影响。 方法 将BV-2小胶质细胞分为对照组、缺氧无糖培养组(oxygen glucose deprivation,OGD组)、及缺氧无糖培养+ 10µM DAPT组(DAPT组);对照组细胞正常培养,OGD组、DAPT组缺氧培养4h(含3% O2, 5% CO2, 92%N2 培养箱中培养)后在正常培养箱中复氧24h。先用CCK8分析10µM DAPT对BV-2小胶质细胞活性的影响;Western blot检测各组BV-2小胶质细胞中活化的Notch信号通路下游蛋白NICD的表达,以及免疫荧光法、RT-PCR、Western blot检测各组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达。数据采用单因素方差分析,用LSD-t法进行组间两两比较,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 CCK8检测OGD组及DAPT组的OD值分别为:0.269±0.013、0.265±0.025 (P>0.05);表明10µM DAPT对BV-2小胶质细胞活性无影响。Western blot提示:与对照组比较,OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞NICD蛋白表达明显增加;与OGD组比较,DAPT抑制Notch信号通路后BV-2小胶质细胞NICD蛋白表达明显减少(对照组:0.632±0.065,OGD组:1.276±0.049,DAPT组:0.938±0.049,P<0.05)。免疫荧光提示:对照组BV-2小胶质细胞少量表达IL-1β;OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达明显增加;与OGD组比较,DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达明显减少。RT-PCR提示:与对照组比较,OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β mRNA表达明显增加;与OGD组比较,DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β mRNA表达明显减少(对照组:1.000±0.173,OGD组:2.741±0.207,DAPT组:1.762±0.177,P<0.05)。Western blot提示:与对照组比较,OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β蛋白表达明显增加;与OGD组比较,DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β蛋白表达明显减少(对照组:0.422±0.030,OGD组:1.236±0.143,DAPT组:0.730±0.047,P<0.05)。 结论 缺氧可激活小胶质细胞Notch信号通路,抑制Notch信号通路可减少缺氧小胶质细胞IL-1β的表达。

韩永丽,黎春常,丁洪光,黄林强,刘新强,陈胜龙,曾红科. 基于Notch通路探讨缺氧对小胶质细胞IL-1β表达的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2020,29(12): 1584-1589.
DOI号:

基金项目:国家自然科学基金(81701875);广州市科技计划(20190410039);广东省医学科研基金(A2017284)

关键词: 缺氧 小胶质细胞 Notch信号通路 NICD IL-1β