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Protective effect of Cyclic helix B peptide on sepsis-induced acute lung injury among mice and its related mechanisms
作者：张雪鹏,张伟韬,屠国伟,邱越,罗哲
发布日期：2021-07-07
【摘要】 目的 探讨硫醚环化 B 螺旋肽（ thioether-cyclized helix B peptide, CHBP）对脓毒症导
致急性肺损伤（ acute lung injury， ALI）的保护作用及其潜在机制。 方法 30 只 SPF 级 6~8 周龄
C57BL/6J 雄性小鼠随机（随机数字表法）分为三组 ：空白对照组、脓毒症致 ALI 组和 CHBP 预处
理组（ 10 nmol/kg）。在 ALI 发生 18 h 后，通过免疫组化检测肺组织 caspase-3 阳性表达，通过免
疫荧光检测肺组织 TUNEL 阳性率。体外培养小鼠肺上皮细胞（ MLE-12）并分为对照组、脂多糖
（ LPS）组和 CHBP 预处理组（ 10 nmol/L）。刺激 24 h 后， ELISA 检测细胞上清液的炎症因子水平，
通过荧光 TUNEL 法检测各组细胞的凋亡比例以及用 Western blot 检测 caspase-3、 Bcl-2、 Bax 蛋白
的表达水平。使用 Graphpad prism 7 软件对数据进行单因素方差分析。计量资料多组间比较采用单
因素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验，以 P<0.05 为差异有统计学意义。 结果 LPS 组小
鼠出现明显 ALI 症状和肺组织病理改变。 CHBP 预处理组肺组织 TUNEL 阳性细胞数量（个 /mm2）
少于 LPS 组，差异有统计学意义 [(22± 2) vs (39.46± 4.51)， P=0.001]。 CHBP 预处理组肺组织
caspase-3 阳性细胞数（个 /mm2）少于 LPS 组 [(28.67± 5.29) vs (52.87± 3.76)， P=0.029]。在体外实
验中，相比 LPS 组， CHBP 预处理明显抑制 MLE-12 细胞上清液炎症因子 IL-6（ pg/mL）[(70.64± 5.59)
vs (123.10± 15.71)， P=0.027]， IL-1β（ pg/mL） [(67.11± 3.39) vs (100.70± 7.61)， P=0.007] 和
TNF-α（ pg/mL） [(76.98± 7.97) vs (138.50± 13.12)， P=0.007] 的 表 达， 抑 制 了 凋 亡 相 关 蛋 白
caspase-3 [(0.085± 0.063) vs (1.198± 0.058)， P=0.01] 以 及 Bax[(0.562± 0.026) vs (0.781± 0.044)，
P=0.041] 的表达，减少细胞凋亡，并且这一趋势与 MLE-12 细胞荧光 TUNEL 检测结果 [CHBP 预
处理组 (30.33± 1.86) vs LPS 组 (45.00± 2.88)， P=0.006] 一致。 结论 CHBP 预处理可以减轻脓毒
症导致的 ALI，这一保护作用很可能是通过抑制炎症反应，减少肺上皮细胞凋亡实现的。
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2021.07.007
基金项目：国家自然科学基金面上项目（ 82070085）；上海市自然科学基金项目（ 20ZR1411100）； 上海市“科技创新行动计划”学术 / 技术带头人项目（ 20XD1421000）
伦理审批号：复旦大学动物伦理委员会
关键词： 硫醚环化B螺旋肽 脓毒症 急性肺损伤 casepase-3 Bax
